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      NGS&生物信息學分析

      傳統的獲得納米抗體序列是通過panning后挑克隆進行驗證與sanger 測序,這種方法通量與克隆分析深度受到很大的限制。高通量DNA測序技術(NGS)為分析納米抗體基因序列,特別是針對大容量,多樣性高的納米抗體庫的分析提供了可能。納米抗體只有重鏈,不涉及輕重鏈的搭配,且片段一般在400bp左右,目前的NGS測序完全能滿足要求。

      NBbiolab采用 Illumina MiSeq 平臺進行測序,測序長度 2×300bp進行分析,對測序得到的原始數據(Raw reads)進行質量控制,數據拼接,過濾掉質量低與長度短的片段獲得干凈的數據(Clean reads);利用IgBlast 和IMGT 對抗體的可變進行VDJ基因定位(VDJ annotation),對納米抗體進行豐度統計,并按照豐度自高至低排序。最后挑取序列進行基因合成,通過實驗驗證功能。


      NGS與生物信息學分析

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