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        研發平臺

        酵母表面展示

        Novel Yeast display-based single domain antibody discovery platform 

        酵母表面展示(Yeast surface display)技術廣泛用于抗體文庫篩選、抗體體工程等領域。NBbiolab納米抗體研發中心積累多年抗體發現技術經驗,成熟高效的酵母展示、篩選系統平臺,為客戶高效的發現高親和力、高穩定性的納米抗體。NBbiolab是目前國內唯一能提供Yeast display高通量發現納米抗體服務的高新技術企業。


        技術原理

        將納米抗體DNA序列插入至含有蛋白質支架-Aga2基因的展示質粒載體中,該載體使用營養標記物在酵母中維持選擇性生長。通過培養基中加入半乳糖誘導酵母進行表面展示,再結合磁珠及FACS分選技術進行多輪篩選,可得到高親和力、高穩定性的克隆。


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        Fig.1. Yeast display 原理與流程


        技術優勢

        Yeast display 與 Phage display 相比,酵母表面展示具有以下顯著優勢:

        1、酵母具有類似于高等真核生物的分泌途徑, 蛋白質折疊在內質網中,其中伴侶蛋白,折疊酶和質量控制機制確保僅分泌正確折疊的蛋白質。而噬菌體是原核系統,有些抗體對大腸桿菌有毒的克隆,其生長緩慢甚至不生長,導致文庫的偏向與克隆的丟失。

        2、通過噬菌體展示篩選更高親和力的抗體時,通常會受到篩選處理過程的不利影響,不僅取決于親和力,還取決于抗體表達水平。而酵母展示系統采用FACS分選技術,基于抗體親和力及展示水平進行篩選,因此消除了表達引起的偏差,且能區分相差很小親和力的克隆。

        3、酵母展示是多價展示,能夠一次通過Sorting直接分選高,中&低親和力的克隆,非常方便

        4、通過使用雙染色的 FACS,可以直接在酵母細胞表面上確定抗體親和力,從而無需耗時的亞克隆、表達和純化。

        5、抗體篩選速度快,3min即可完成10萬個細胞的分選,獲得100+的unique sequence 候選克隆。

        6、在相同的展示系統下可對抗體的親和力和穩定性進行優化。


        參考文獻

        1.McMahon, C., Baier, A.S., Pascolutti, R.et al.Yeast surface display platform for rapid discovery of conformationally selective nanobodies.Nat Struct Mol Biol 25, 289–296 (2018) doi:10.1038/s41594-018-0028-6

        2.Uchański, T., Z?gg, T., Yin, J.et al.An improved yeast surface display platform for the screening of nanobody immune libraries.Sci Rep9,382 (2019) doi:10.1038/s41598-018-37212-3

        3.Zhuo Yang,Yue Wan.et al.A cell–cell interaction format for selection of high-affinity antibodies to membrane proteins.PNAS July 23, 2019 116 (30) 14971-14978. doi.org/ 10.1073/pnas.1908571116


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