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        技術服務

        高通量組合式納米抗體研發平臺


        NBbiolab 納米抗體研發中心專注于納米抗體研發,目前建立了國際一流的基于Yeast display,Phage display,NGS &生物信息學分析的高通量納米抗體研發平臺?;诮M合式的高通量納米抗體發現平臺,NBbiolab已經為國內70多家抗體藥企業提供了納米抗體發現服務。


        高通量納米抗體研發平臺


        傳統的方法首先免疫羊駝,在動物體內進行親和力成熟,然后采用phage display 方法,通過phagemid 載體構建單價展示系統與增加選擇壓力來獲得高親和力納米抗體。這是目前國內外最常用的方案。

        優勢:

        a)大腸桿菌具有高的轉化效率,從而獲得高庫容量的抗體文庫

        b)實驗設備要求低,不需要特殊儀器

        c)周期短,成本低


        缺點:

        a)抗體基因來源于真核體系,而phage display技術利用原核體系,一些對大腸桿菌有毒的克隆就會生長緩慢甚至死亡,因此在擴增過程中會導致克隆丟失;

        b)大腸桿菌在生長過程中不能保證每個克隆在擴增過程中的均一性,從而導致克隆篩選出現偏向;

        c)未插入片段的載體或移碼突變的片段在擴增過程中的生長速率遠遠超過正確插入片段的克隆,導致庫容量的直線下降。


        NBbiolab 采用組合式的研發路線


        方案一:

        傳統的挑單克隆進行鑒定,費時費力,且通量低,只能獲得高豐度的克隆,低豐度的克隆丟失。NBbiolab采用同源重組與“零背景載體”技術構建高質量噬菌體展示文庫,經過1~2輪的panning后,進行NGS測序與生物信息學分析,獲得大量的候選克隆,并剔除有額外二硫鍵的克隆。


        方案二:

        通過我們的同源重組與“零背景載體”技術構建高質量噬菌體展示文庫,經過1~2輪的panning后,將洗脫噬菌體的抗體片段構建到Yeast display 載體中,直接通過FACS分選到96孔或384孔板中,最后通過流式進行單克隆鑒定。通過FACS分選,可直接獲得高親和力的納米抗體,不需要對克隆進行表達純化,直接區分克隆之間的親和力高低。


        方案三:

        免疫后將VHH基因克隆Yeast display載體中,通過磁珠或FACS進行1~2輪的分選直接獲得高親和力的克隆,將分選的克隆進行NGS測序與生物信息學分析,獲得100+的候選克隆。

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